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影響PCR實(shí)驗(yàn)的因素之一、PCR耗材
在PCR實(shí)驗(yàn)中,影響擴(kuò)增效果的因素有很多。我們能想到的有dNTP的質(zhì)量與濃度、模板核酸的量與純化程度、引物的設(shè)計(jì)、DNA聚合酶的濃度、擴(kuò)增長(zhǎng)度等問題。
實(shí)際上,使用的耗材也可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,而這往往被我們所忽略。因此在選擇實(shí)驗(yàn)耗材前,我們還需要了解BUNSEN本生PCR耗材相關(guān)的特性和術(shù)語。
如何選擇合適的PCR耗材,本生簡(jiǎn)述:
1、原材料
PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材質(zhì)。
因其為生物學(xué)惰性材料,表面不易粘附生物分子,且有著良好的化學(xué)耐性,及溫度耐受性 (可121℃高壓滅菌,也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化)。這些材料通常會(huì)與試劑或者樣品直接接觸,因而在生產(chǎn)制備過程中需要選用高質(zhì)量的材料和良好的加工工藝。
2、選擇合適的容積
PCR管的體積規(guī)格大多數(shù)都可以滿足PCR反應(yīng)要求。但是在滿足實(shí)驗(yàn)要求的基礎(chǔ)上,優(yōu)先推薦選用低容管。因?yàn)榈腿莘磻?yīng)管/板有著較小的上方空間,可提高熱傳導(dǎo)率并降低蒸發(fā)。而且在加樣時(shí),需要避免加樣過量或過少。過量會(huì)導(dǎo)致熱傳導(dǎo)率下降,溢出及交叉污染,而加樣過少可能會(huì)造成樣品蒸發(fā)損失。
大家可依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求選用合適的產(chǎn)品:
BUNSEN本生PCR系列(八聯(lián)管,PCR板,封板膜) | ||
BS-PCR-081-C | 0.1ML 透明PCR八聯(lián)管(含光學(xué)平蓋) | 125排/盒,10盒/箱 |
BS-PCR-081-M | 0.1ML 乳白色PCR八聯(lián)管(含蓋) | 125排/盒,10盒/箱 |
BS-PCR-082-C | 0.2ML 透明PCR八聯(lián)管(含光學(xué)平蓋) | 125排/盒,10盒/箱 |
BS-PCR-082-M | 0.2ML 乳白色PCR八聯(lián)管(含蓋) | 125排/盒,10盒/箱 |
BS-PCR-0102-CM | 0.1ml/0.2mlPCR 8聯(lián)排管蓋, 光學(xué)平蓋, 透明 | 125排/盒,10盒/箱 |
BS-PCR-96-F02-C | 0.2ml 96孔PCR反應(yīng)板 | 10塊/盒,20盒/箱 |
BS-PCR-RFM | q PCR透明熱封膜 | 100張/盒 |
BS-5R-250 | 東千用PCR八聯(lián)軟管蓋 | 250條/包 |
BS-D-250 | 凍千用PCR八聯(lián)管 | 250條/包 |
3、PCR管管蓋的選擇
平蓋與凸蓋各有優(yōu)勢(shì):
平蓋可為qPCR提供精確的熒光信號(hào)傳遞;便于書寫標(biāo)記;合蓋容易,密封性好,易于操作。
凸蓋與PCR儀熱蓋接觸,減少壓力引起的反應(yīng)管變形,更好的防止液體蒸發(fā)。但會(huì)影響熒光信號(hào)傳遞,無法應(yīng)用于qPCR實(shí)驗(yàn)。
4、96孔板裙邊的選擇
無裙邊板:可適用于大多數(shù)的PCR儀或qPCR儀,但不適用于自動(dòng)化、應(yīng)用。移液過程中穩(wěn)定性不高,需要配合板托使用。
半裙邊板:可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼,適合自動(dòng)化應(yīng)用,且有著較好的移液穩(wěn)定性。
全裙邊板:非常適用于自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩(wěn)定性高。
5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇耗材
根據(jù)檢測(cè)方法的不同,耗材的選擇也不同。
PCR實(shí)驗(yàn)分為普通PCR法和熒光定量PCR法。普通PCR法一般是終點(diǎn)PCR跑膠法測(cè)定,所以所用耗材的導(dǎo)熱性和密封性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著密不可分的關(guān)系;而熒光定量PCR是實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào),除了導(dǎo)熱性和密封性外,對(duì)透光性和避光性也有所要求。
簡(jiǎn)而言之,做熒光定量PCR的耗材也可以做普通PCR,反之則不行。
導(dǎo)熱性
導(dǎo)熱性越好越均一,PCR的速度就越快,準(zhǔn)確度也越高。
密封性
密封性越好,產(chǎn)物的揮發(fā)越少,得到的產(chǎn)物就越多,同時(shí)氣溶膠的產(chǎn)生也越少,對(duì)于下一輪實(shí)驗(yàn)的污染也就越少,也就意味著假陽性的產(chǎn)生率越低。
避光性
這是針對(duì)熒光定量而言的,如果我們?cè)谡麄€(gè)實(shí)驗(yàn)過程中沒注意避光,帶有熒光的試劑過度被消耗,那直接就會(huì)影響我們實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增效率,導(dǎo)致產(chǎn)生不準(zhǔn)確的結(jié)果。
透光性
這也是對(duì)于熒光定量而言,我們知道它是一種實(shí)時(shí)定量的方式,那么耗材本身的透光性就直接關(guān)系到我們檢測(cè)到的熒光信號(hào)多少。如果選擇耗材透光性良好,需要檢測(cè)到的信號(hào)就會(huì)變得微弱,那就會(huì)造成我們對(duì)結(jié)果的誤判。所以對(duì)于熒光定量而言,白色PCR板效果優(yōu)于透明PCR板。
PCR耗材 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來。
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